nSMOL - How Nano Technology and LC-MS Improved Speed and Accuracy of mAb Bioanalysis
nSMOL Antibody BA Kit
LC/MS/MS Sample Prep Kit for Quantitative Analysis of Monoclonal Antibodies
O nSMOL (Proteólise Nanométrica Limitada pela Orientação Molecular) é uma técnica única e inovadora da Shimadzu que permite a proteólise seletiva da região Fab de anticorpos monoclonais. O nSMOL Antibody BA Kit é um kit de reagente pronto para uso para coletar anticorpos monoclonais do sangue ou outras amostras biológicas utilizando resina de coleta da imunoglobulina e, em seguida, realizar a proteólise seletiva da região Fab desses anticorpos por meio de tripsina imobilizada em nanopartículas. Os peptídeos derivados de região variável produzidos pela proteólise direcionada podem então ser quantificados através de medições de MRM utilizando um LCMS triplo quadrupolo de alta performance como os LCMS-8050/8060(NX). O fluxo de trabalho rápido e conveniente fornecido pelo kit nSMOL Antibody BA, melhora drasticamente a produtividade e a robustez das bioanálises de mAb por LCMS.
- Desenvolvimentos de Métodos mais Rápidos e Menos Dispendiosos
Melhora drasticamente a resposta e a repetibilidade quantitativa. Não são necessários anticorpos ou ligantes para captura. - Proteólise nSMOL
Coleta seletiva de peptídeos Fab. Limita a contaminação por excesso de peptídeos ou tripsina. - Desempenho
Os ensaios realizados são altamente sensíveis e precisos para uma variedade de anticorpos. - Grande versatilidade
Aplicável a uma ampla variedade de anticorpos biofarmacêuticos.
Fluxo de Trabalho Simples
Esse kit permite uma alta reprodutibilidade de dados e evita passos complexos normalmente associados a digestão de proteínas como desnaturação, redução e alquilação. Além disso, não há necessidade de extração de fase sólida após a reação. Após o preparo pelo nSMOL, as amostras podem ser injetadas diretamente no LCMS.
Componentes do Kit
O nSMOL Antibody BA Kit fornece reagentes e protocolos para o preparo de amostras via método de nSMOL
Especificações do Produto
| Item | Especificações |
| Analitos alvo | Monoclonal antibodies in serum or plasma (including antibody pharmaceuticals) |
| Número de análises | 100 experimentos |
| Volume aproximado de amostra | 90 µL (antes da injeção no LCMS) |
| Temperatura de armazenamento | Especificada para cada reagente |
| Data de validade | 18 meses a partir da data de envio se fechada e armazenada a 4°C (para as FG Beads Trypsin DART, 18 meses da data de envio se armazenada a -80°C) |
Configuração do Produto
| Reagente | Quantidade | Capacidade | Temperatura Armazenamento |
| Resina de Coleta de Immunoglobulina | 2 | 1,3 mL/cada | 4°C |
| Solução 1 de lavagem (ligação) | 1 | 80 ml | 4°C |
| Solução 2 de Lavagem | 1 | 80 ml | 4°C |
| Solução de Reação | 1 | 10 ml | 4°C |
| Solução de Reação Aprimorada | 1 | Liofilizada | 4°C |
| Solução de Stop da Reação | 1 | 1 ml | 4°C |
| FG Beads™ Trypsin DART™ | 1 | 1,1 ml | -20°C*1 |
*se armazenado por mais de 1 mês, armazenar a -80°C .
Os consumíveis a seguir devem ser adquiridos separadamente:
| Consumível | Fabricante | P/N |
| Tubo de Reação com Encaixe para nSMOL | SHIMADZU | 225-32260-91 225-32260-92 |
| Ultrafree-MC, GV 0,22 μm | Merck Millipore | UFC30GV00 UFC30GVNB |
| Micro tubo 2mL, PP | SARSTEDT | 72.708 |
Observação: Para outros equipamentos necessários, consultar manual de instruções
Itens Recomendados
Consulte as especificações e produtos recomendados na tabela abaixo, e prepare os materiais necessários:
| Itens Exigidos | Especificações Recomendadas | Produtos de Referência (RETIRAR SUGESTÕES) |
| Filtro de 5 μm | Prepare uma seringa e filtro de seringa com tamanho de poro de 5 μm. Millex-SV 5.0 μm, PVDF, 25 mm, |
PVC housing, non-sterile, SLSV025NB, Merck Millipore |
| Filtro de 0.8 μm | Prepare uma seringa e filtro de seringa com tamanho de poro de 0.8 μm. | Millex-AA Syringe Filter Unit, 0.80 μm, mixed cellulose esters, 25 mm, PVC housing non-sterile, SLAA025NB, Merck Millipore |
| Tubo de 2 mL | Tubo de Fundo Redondo de Polipropileno | Item: Safe-Lock Tubes P/N:0030 120.094 Vendido por:Eppendorf |
| Mixer de Micro Tubos | ・Usado a temperatura ambiente ou 50°C. ・Pode ser instalado dentro da incubadora. ・Conjunto disponível com tubo de 1,5 mL, de 2,0 mL e tubo com filtro. |
Item: Micro tube mixer Modelo:MT-400 Vendido por:Tomy Seiko Co., Ltd |
| Incubadora | ・Incubadora com umidostato, ou incubadora que comporte uma bandeja de água para manter saturação de pressão de vapor ・Grande suficiente para que o mixer de micro tubos acima possa ser instalado |
Item:Incubator with a freezer Modelo:MIR-254-PJ Vendido por:Panasonic Healthcare Co., Ltd. |
| Ponteira de Micropipeta | Ponteira sem plastificante para evitar contaminação no MS (transparente) | (1) Marca: Rainin Vendido por:Mettler Toledo (2) Marca: Biohit Vendido por:Sartorius |
| Centrífuga de Bancada | Capacidade de centrifugação para tubos de 1,5 mL, 2,0 mL, e tubos com filtros a 10.000 μg e 12.000 μg | Nome da linha do produto: MX series high speed micro centrifuge Vendido por:Tomy Seiko Co., Ltd |
| Estante para Tubos Magnética | Capaz de separar as FG beads trypsin DART magneticamente | Item:Magnet stand Modelo:TA4899N12 Vendido por:Tamagawa Seiki Co., Ltd. |
| Vials de LCMS | De baixa adsorção ou vials sem plastificantes | Item:TORAST-H Bio Vial P/N:GLCTV-H-BIO Vendido por:Shimadzu GLC |
| Coluna analítica | Capaz de separar peptídeos na escala analítica |
Item:Shim-pack GISS |
| Solução de Padrão Interno | Capaz de corrigir sensibilidade e tempo de retenção | Item:ProteoMass P14R MALDI-MS standard Catalog no:P2613 Vendido por:Sigma-Aldrich |
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