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Confiabilidade nos dados por meio da alta repetibilidade do tempo de retenção
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O alto desempenho do LC-20ADnano equipado com o sistema RFC é demonstrado pela repetibilidade
do tempo de retenção com desvio padrão relativo (RSD) menor que 0.20% (n=6) a vazão
de 300 nL/min. A análise proteômica exige a separação e a identificação de muitos
peptídeos digeridos por enzimas que apresentam características muito semelhantes.
Também é muito importante a repetibilidade do tempo de retenção para comparação de
pico de amostras em análise diferencial. A alta de repetibilidade do Prominence nano
robustamente suporta a aquisição de dados de alta precisão necessária para a eficácia
da analise proteômica.
Repeatability for BSA Digest Sample (Retention time repeatability of major peaks)
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Na analise de amostras complexas como proteínas digeridas por enzimas, a separação
em fase reversa unidimensional não ofereceu suficiente capacidade de separação de
picos. Inversamente, a separação 2D proporciona maior capacidade de separação, permitindo
a separação de amostras complexas. Por isso, a separação 2D é realizada usando uma
combinação de modos de separação que não estejam sujeitos a interação mútua.
O sistema Prominence nano permite a fácil construção de um 2D LC combinando a troca
catiônica com o modo de fase reversa, fornecendo um sistema central com todos os resultados
necessários para uma efetiva análise proteômica. A figura abaixo mostra uma análise
de 200 fmol de proteína de levedura a um maior número de picos do que pode ser alcançado
em um único sistema 1D.
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1st Dimension
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Column
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PolysulfoethylA (50mmL.×1mmI.D.)
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Mobile phase
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Ammonium formate buffer
Salt concentration step gradient
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Flow rate
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40 uL/min
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Trap column
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L-column Micro (5 mmL.×300 m I.D.)
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Trapping period
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5 min
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Desalting solvent
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Water/Formic acid = 100/0.1
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Desalting flow rate
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40 uL/min
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Desalting period
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5 min
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2nd Dimension
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Column
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PicoFrit (100 mmL.×75 m I.D.)
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Mobile phase
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Gradient elution
A) Water/Acetonitrile/Formic acid = 95/5/0.1 (v/v)
B) Water/Acetonitrile/Formic acid = 5/95/0.1 (v/v)
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Flow rate
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600nL/min
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Temperature
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Ambient temperature
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Detection
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LCMS-IT-TOF
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Sample
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Proteins in Yeast Protein Digest
(equivalent to 200 fmol)
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* Outras combinações de modos separação são possíveis utilizando diferentes tipos
de colunas na primeira e na segunda dimensão, respectivamente Neste caso, pode haver
alguma limitação da separação ou no método de detecção, devido à interação entre modos
de separação ou os tipos de fase móvel utilizada.
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Effortless Coordination with MALDI-TOFMS
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O sistema Prominence nano pode ser usado não apenas em linha conectado à uma nano-ESI
MS interface s, mas também a um MALDI-TOFMS com o Accuspot, um placa MALDI spotter.
Para um spotting acurado de cada pico cromatográfico na placa MALDI, um LC com controle
de vazão otimizado para o intervalo de centenas de nL a 1µL é necessário. O sistema
Prominence nano é perfeitamente adaptado para este fim.
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Analysis of BSA Enzyme Digest (equivalent to 500 fmol)
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Detector
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UV220 nm
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Column
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MonoCap for Fast-flow (250 mmL. × 100 µm I.D.)
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Mobile phase
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A) Water/Acetonitrile/TFA = 95/ 5/0.1 (v/v)
B) Water/Acetonitrile/TFA = 10/90/0.1 (v/v)
Gradient elution
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Flow rate
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1 µL/min
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Temperature
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Ambient temperature
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Trap column
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ODS (1 mmL. × 0.5 mm I.D.)
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Spot interval
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12-second intervals
(Spot volume per spot : 200 nL excluding matrix solution)
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