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Estão sendo utilizados no LNT/NIMH*, como front-end do LC/MS, 5 ou 6 sistemas
de micro HPLC, que foram configurados usando módulos com algumas modificações do LC-VP
da Shimadzu. Neste micro HPLC, para minimizar o volume vazio gerado no autoamostrador
e melhorar a sensibilidade, é adotado o método exclusivo de introdução da amostra
aplicando coluna trap. Graças a esse método, o atraso do gradiente é minimizado mesmo
a escala micro, menor que 10µL/min, e possibilita realizar análise automática altamente
exata. A figura seguinte mostra o diagrama de fluxo de sistema de micro HPLC. O sistema
de micro HPLC é acoplado com ESI/MS e é utilizado como ferramenta muito poderosa para
identificação de peptídeos e proteínas. Usando este sistema, possibilita analisar
a proteína tryptic digested a ordem de fentomol.
LNT: Labotatório de Neurotoxicologia
NIMH: Instituto Nacional de Saúde Mental
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1, 5, 6: LC-10ADvpm, 2: SIL-10ADvp, 3: FCV-12AHi, 4: Coluna Trap (2 mm de comprimento
x 0.5 mm D.I.), 7: Misturador (2 mL),
8: Coluna Capilar C18 (100 mm de comprimento x 0.3 mm D.I.), 9: Detector
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A figura à direita é um exemplo de dados por este sistema. O gráfico superior é cromatograma
de massa e o inferior é o espectro de massa do maior pico (cor vermelha). Nestes dados,
implementamos separação em gradiente a 10µL/min. A fase móvel usada é ácido fórmico
e acetonitrila. Para amostra, 500fmol de mistura de proteína de tryptic digested (albumina
do soro bovino, myoglobin, b casein) é utilizada.
A foto e os dados foram fornecidos pelo LNT/NIH (NIH).
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